Небачений спалах епідемії смертельного вірусу Ебола в західній Африці, яка загрожує перекинутися на європейський континент. СНІД, що знищує десятки мільйонів людей, інші невідомі раніше страшні хвороби людей, тварин, рослин. Звідки вони звалюються на нашу голову? Яку роль у цьому відіграють секретні лабораторії ЦРУ та військових відомств США?

"Не може бути! Рак не заразний! Все це вигадки, на кшталт „теорії змови“ чи зустрічей із марсіанами!». Так відреагувала американська влада на звинувачення уряду Венесуели у тому, що великого лідера Боліваріанської революції Уго Чавеса знищили, заразивши його вірусом раку.

Проте експерти вважають, що така велика кількість хворих на рак латиноамериканських лідерів (причому саме лівого напрямку!) приблизно в один і той же час неможливо пояснити природними причинами. Серед них, поряд з Чавесом, аргентинський президент Нестор Кіршнер, яка змінила його на посаді Крістіна Кіршнер, бразильський президент І. Лула да Сілва, що прийшла до влади слідом за ним Ділма Русеф, парагвайський президент Фернандо Луго (якого повалили під час правого путчу 201). , влаштованого ЦРУ, і незабаром після цього діагностували рак імунної системи). Кубинський лідер Фідель Кастро ледь залишився живим після загадкового онкологічного захворювання кишківника, яке вразило його після «Народного саміту» 2006 р. в аргентинському місті Кордова.

Дещо відомо, що задовго до звірячих концтабірних експериментів у німецьких таборах смерті під час Другої світової війни, американці проводили подібні досліди над жителями Латинської Америки під егідою Рокфеллерівського «Інституту медичних досліджень».

Один із бузувірів, Корнеліус Родс в 1931 р. писав своєму приятелю: «Тут на Пуерто-Ріко все чудово, крім пуерториканців. Вони безсумнівно - найбрудніші та ледачі дегенерати з злодійської раси, що населяє цю півкулю. Для громадського здоров'я необхідно якийсь засіб, щоб їх знищити. І я зробив усе, щоб прискорити цей процес - убив вісьмох під час дослідів, а багатьох заразив на рак. Страхування через хворобу та соціальні виплати тут немає - це викликає захоплення у лікарів, які можуть вільно заліковувати до смерті і катувати своїх невдачливих пацієнтів».

Доктор вводив внутрішньовенно біологічні речовини, що викликають рак, і щонайменше 13 пацієнтів загинули внаслідок цих жорстоких експериментів.

У 50-і роки Родс став директором дослідницьких програм з хімічної та біологічної зброї в армійському центрі Форт Детрік (Меріленд), випробувальних полігонів у пустелі Юти і на території Панамського каналу, потім увійшов до Американської Комісії з енергетики, яка піддавала американців, які нічого не підозрювали. опромінення для визначення рівня «безпечної радіації» та випадків виникнення злоякісних пухлин внаслідок цих експериментів.

Після смерті Родса Американська асоціація онкологів започаткувала премію його імені. Однак у 2004 р., на хвилі скандальних викриттів його бузувірських дослідів, голова асоціації С. Хорвітц заявила про те, що найвища нагорода онкологів США не буде надалі пов'язана з ім'ям Родса через «суперечливий характер його діяльності».

Таких негідників від науки в США було хоч греблю гати і вони відчували майже всю винайдену ними заразу спочатку в Латинській Америці (не забуваючи і про досліди на своїх же громадянах). Після війни поле звузилося через те, що багато хто став звертатися за медичною та науковою допомогою до СРСР. Але після розвалу Радянського Союзу перед цими живодерами відкрилися воістину неосяжні перспективи.

Обама вже кілька разів був змушений вибачатися перед латиноамериканськими країнами за експерименти над людьми в 40-х - 50-х роках, які призводили до поширення сифілісу та інших венеричних хвороб, масового безпліддя, різних епідемій. Однак подібні вибачення (тільки після публікації незаперечних свідчень!) не відродять до життя мільйони загиблих та постраждалих від біотерору США, як і не призведуть до припинення подібних «досвідів» у майбутньому (за принципом «не спійманий – не злодій»).

З кінця 60-х років почалася прискорена розробка та створення різних модифікацій вірусу раку. Роботи координувалися з «Національним інститутом онкології», який офіційно розробляв засоби лікування «хвороби віку», а неофіційно займався участю у проектах ЦРУ із застосування вірусу раку у військових та політичних цілях.

Незважаючи на урочисте підписання у 1972 р. у Москві, Лондоні та Вашингтоні Конвенції про заборону розробки, виробництва та накопичення запасів бактеріологічної (біологічної) та токсинової зброї та про їх знищення (КБТО), робота у Форт Детріку кипіла на повну силу і до 1977 р. вироблено 60 тис. літрів канцерогенних та імуноподавлюючих вірусів.

У роботах брали активну участь професори Р. Перселл, М. Хіллерман, С. Крагмен і Р. Макколум, які використовували «коктейль» з вірусу гепатиту «Б» у поєднанні з онкогенною речовиною для експериментів не тільки над резус-макаками та шимпанзе, а й над американськими учнями з Уіллоубруцької державної школи для розумово відсталих дітей.
У 1971 р. американська фарма-компанія «Літтон Біонетікс» уклала контракти з низкою африканських країн на дослідження онкохворих з лімфомою Біркета, пов'язаною з інфекційним онковірусом Епштейна-Барра, а також лейкемією та саркомою. Цікаво, що лімфома Біркета була виявлена ​​в західній Уганді вперше після того, як там попрацювали лабораторії «Національного онкологічного центру США», а також інші медичні установи, які спонсорували Рокфеллер.

Один із експертів, Р.Кінг, заявив у 80-ті роки, що фахівці зі США заражали людей саркомою для того, щоб «виділити геном вірусу шляхом рекультивації, гібридизації, рекомбінації вірусів, мутацій та інших технічних прийомів».

У слуханнях сенатської комісії Черча в 1975 р. доктор Чарльз Сенсені, який працював у лабораторії Форта Детрік, зізнався в тому, що для знищення неугодних діячів ЦРУ застосовувало біологічно активні речовини, які спричиняли швидкоплинні серцеві захворювання та рак. Він продемонстрував зразки зброї, за допомогою якої інфікувалися намічені жертви. Серед них була парасолька, яка вистрілювала мініатюрними дротиками при розкриванні, а також спеціальний духовий пістолет для стрільби голками, зробленими із замороженої отруйної речовини. Будучи товщиною з людське волосся і довжиною в кілька міліметрів, ці голки без пошкодження проходили через тканину одягу і при ін'єкції викликали больове відчуття не сильніше за комариний укус, миттєво розчиняючись під шкірою.

Серед "новинок" американських біотерористів були також продемонстровані аерозолі для зараження "мішеней" смертельними хворобами після розпилення з літаків, а також "стрибуючі віруси", що поширюються через комах (бліх, павуків, комарів), які перестрибують або перелітають з інфікованих тварин. ЦРУ стало «піонером» і в способах зараження: через ін'єкції, інгаляції, контакт зі шкірою зараженого одягу, через систему травлення при прийнятті їжі, напоїв і навіть використанні зубної пасти.

Низка експертів вважають, що одним із перших неугодних США політичних лідерів, заражених новою онкологічною біозброєю, став президент Анголи Агостіньо Нето. Він помер у московській центральній клінічній лікарні у 1979 р. у віці 57 років від невідомої досі форми швидкоплинного раку. Ще однією жертвою став колишній президент Чилі Едуардо Фрей, який відкрито виступав проти ставленика США генерала Піночета. Фрей помер у лікарні Сантьяго у січні 1982 р., заразившись невідомою швидкоплинною хворобою після проходження стандартного медичного огляду.

Тож, можливо, через 50 років будуть розсекречені архіви ЦРУ, і стануть відомі таємниці смерті Уго Чавеса та інших світових лідерів. Існує така величезна кількість документів щодо використання американськими спецслужбами вірусів раку, що існування цієї зброї не викликає жодних питань. Єдине питання – як його «занесли» і хто був безпосереднім виконавцем.

* * *

«У найближчі 5–10 років стане можливим створити синтетичний вірус, який взагалі не існує у природі, і який не зможе бути пригнічений імунною системою людини; нові, штучно створені віруси будуть неприступними для ліків, проти них марно використовувати звичайні засоби лікування інфекційних захворювань, антибіотики, вакцини та антидоти». Таку сенсаційну заяву зробив головний армійський експерт-вірусолог Д. Макартур, виступаючи у 1969 р. перед комісіями конгресу США («комісія Сайкса»), яка мала дати рекомендації щодо виділення бюджетних коштів для армії. І запросив небагато – лише близько 10 млн. доларів!

Гроші були виділені та до роботи було залучено сотні наукових співробітників та експертів. Одним із творців вірусу СНІДу, мабуть, був доктор Роберт Галло, який у 1987 р. навіть отримав від міністерства охорони здоров'я США патент, що встановлює його пріоритет у винаході «вірусу, який пригнічує імунну систему людини».

Хвороба вирвалася з лабораторій та вперше була виявлена ​​навесні 1981 р. у Каліфорнії (США). І не мала жодного відношення (як нас намагаються переконати американці) до Африки та «маленьких зелених мавпочок».

У травні 1987 р. в лондонській Таймс з'явилася стаття, в якій стверджувалося, що щеплення проти віспи в Африці (за ініціативою «гуманістів» із міністерства охорони здоров'я США) викликали спалах СНІДу. А вакцинацію пройшли мільйони людей! Потім подібна "вакцинація" проводилася в Гаїті, Бразилії та інших країнах.

Звинувачення США у виготовленні вірусу СНІДу розпочалися вже з середини 80-х років. Професор берлінського Університету імені Гумбольта Якоб Сегал стверджував, що цей вірус є «продуктом експерименту, виробленого в лабораторних умовах з метою створення біологічної зброї». У ЗМІ США це все представлялося як «радянська пропаганда». Але в 90-х роках сам доктор Галло повідомив про те, що він протестував ще один, «альтернативний» штам СНІДУ, який може проникати в організм через клітини епітелію (тобто через шкіру), підвищуючи ризик отримання захворювання через розпилення активної речовини в атмосфері. .

Доктор С. Монтейт був одним із перших, хто ще 1981 р. описав величезний епідемічний потенціал нового вірусу, потенційно катастрофічні наслідки його застосування «світовою елітою», а також довів його штучний характер.

І ця нова якість перешкоджає поки що будь-яким спробам створення вакцини проти СНІДу. Саме тому протягом довгих років не було створено жодного ефективного препарату проти цієї хвороби.

Число інфікованих СНІДом досі невідоме, оскільки навіть у США уряд перешкоджає всім ініціативам, спрямованим хоча б на приблизний підрахунок. За різними оцінками СНІДом заражено від 50 до 100 млн осіб. Найбільше в Африці - в деяких країнах (Уганді, Кенії) понад 50% населення хворіють на цю страшну хворобу.

Вважається, що від неї до теперішнього часу від СНІДу померло близько 40 млн. чоловік - майже стільки ж, скільки загинуло під час Другої світової війни!

* * *

За даними Всесвітньої організації охорони здоров'я, на заході «чорного континенту» загинули вже понад 600 людей, які заразилися лихоманкою Ебола.

Нинішній спалах захворювання став найбільшим за всю історію медичних спостережень.
У Нігерії, Ліберії та інших африканських країнах на кордонах встановлюють спеціальні кордони, лікарі ретельно контролюють усіх, хто в'їжджає і виїжджає. Лихоманка Ебола вважається смертельно небезпечним захворюванням, якого найбільш сприйнятливі люди, примати і свині. Вакцини від нього немає.

Епідемія розпочалася у Гвінеї у березні нинішнього року. На цей час хвороба захоплює все нові території у Сьєрр-Леоні, Ліберії та Малі. Існують побоювання, що вона пошириться не лише по всій західній Африці, а й проникне до Європи.

Цікаво, що у осередках епідемії різко почастішали випадки нападу місцевих жителів на офіси міжнародної організації «Лікарі без кордонів». Місцеві жителі звинувачують лікарів у тому, що саме вони занесли вірус у цей регіон. Прокотилися масові демонстрації протесту проти урядів африканських країн, які нічого не роблять для виправлення ситуації.

Погроми офісів «шановної міжнародної організації» подаються в західному друку як приклади «ірраціональності та абсурду». Тим більше, що «лікарі без кордонів» всіляко підносять свої етичні принципи, запевняючи, що вони «завжди знаходяться поруч із жертвами». Але чи не їхніми власними жертвами - як вважають «нерозумні» африканці?

Чому західні медики вперто не залишають Гвінею, Ліберію, Малі та Сьєрра-Леоне? Адже ці країни охоплені хаосом громадянських воєн та конфліктів, у яких найактивнішу участь беруть європейські країни та США. Лише Франція витратила сотні мільйонів євро на військові операції в Малі.

Все - для відновлення колоніальної влади у західній та північній Африці. І саме ці території «зачищаються» від місцевого населення під час епідемій Еболи та інших інфекційних хвороб. Причому дивним чином страждають лише місцеві жителі, але не «миротворці» із Франції.

А «медики без кордонів» не передають ліки та обладнання місцевій владі та не залишають зону конфлікту. Саме це і дає вагоме підґрунтя місцевим жителям підозрювати іноземних «ескулапів» у тому, що саме вони поширюють нові штами зарази серед африканців.

Як вважають багато експертів, там випробовується нова «етнічна» зброя, яка діє вибірково лише на африканців. Але, мабуть, є й модифікації для інших расових та етнічних груп. У 2006 р. один з провідних американських вірусологів Ерік П'янка, виступаючи на урочистому засіданні в Техаському університеті, заявив, що за допомогою нового штаму лихоманки Ебола (за його словами, «що володіє фантастичною летальністю») можна «на благо планети» скоротити людство на 90 %. Американські вірусологи, які були присутні в залі, в одностайному пориві встали і влаштували йому овацію.

* * *

З 70-х у США велися прискорені розробки «етнічної зброї». І як вважають багато експертів, до теперішнього часу винайдені нові штами смертельних вірусів, які можуть поширюватися лише у певному етнічному середовищі.

Так, «атипова пневмонія» вражає найбільше китайців та жителів Південно-Східної Азії, лихоманка Ебола та СНІД – африканців. Ізраїльські вчені намагаються створити подібну ж біозброю, спрямовану проти арабів.

Британська медична асоціація нещодавно заявила, що «прогресуючий розвиток генетики здатний вже найближчими роками стати причиною проведення небачених за масштабом етнічних чисток».

Думка про встановлення «біологічного панування над світом» зріє вже не тільки в головах божевільних людожерів-вірусологів, а й у розрахунках політиків, військових стратегів, експертів! Так, нещодавно цю ідею озвучили респектабельні неоконсервативні політики США в доповіді «Нові рубежі захисту Америки».

Там пишеться, що, безумовно, військове панування над світом мають насамперед забезпечити балістичні та крилаті ракети, радіокеровані літаки («дрони») та підводні човни, супутникову зброю. Але, поряд з цим, «протягом найближчих років мистецтво ведення війни в повітрі, на землі та морі повністю відрізнятиметься від нинішнього, і бої вестимуться в нових вимірах – у космосі, „кібер-просторі“, а також на внутрішньоклітинному та мікробному рівні». І далі йдеться про те, що «просунуті форми біологічної зброї, які вибиратимуть як мішені певні людські генотипи, зможуть вивести цей напрямок зі світу терору на гідне місце серед політично виправданих засобів»!

* * *

Влада США добре засвоїла уроки «Манхеттенського проекту», зокрема, передачу провідними світовими фізиками даних про атомну зброю Радянському Союзу. Американські вчені зробили це не за гроші, а виходячи з тверезої оцінки свого уряду, який, не вагаючись, розбомбив би СРСР та всіх інших потенційних конкурентів на шляху до світового панування.

Тому зараз щодо розробників нових вірусів задіяні найжорстокіші правила усунення «небажаних свідків». Смертність серед них у десятки разів перевищує середньостатистичні показники.

Незалежні американські експерти нарахували понад сотню «загадкових» смертей (в авіа- та автокатастрофах, від «невідомих» хвороб, «нещасних випадків») серед вірусологів та мікробіологів, які працювали за контрактами на ЦРУ та міністерство оборони.

У 2001 р., відразу ж після вибуху «башт-млинців» всіх американців розбурхали повідомлення про листи зі суперечками сибірки, які розсилалися в редакції журналів, газет, ТВ-компаній, політичних діячів. 17 людей заразилися, п'ятеро загинули. Ці листи послужили головним приводом для політичного повороту, який направив агресію США проти Іраку. "Аль-Каїда" відійшла в тінь, а в усіх ЗМІ зазвучало, що "найбільша біологічна атака в історії США" була організована Саддамом Хусейном.

Коли цей поворот був закріплений (і використаний пізніше для звинувачення Хусейна у розробці біологічної зброї, що стало одним із аргументів для вторгнення до Іраку), швидко з'ясувалося, що штам вірусу можна було отримати лише з лабораторії ЦРУ у Форт Детріку. Там знайшли «слабку ланку» - вірусолога Брюса Айвінса, який, будучи ревним католиком, часто скаржився, що йому з релігійних мотивів не подобається робота. І в липні 2008 р. він, нібито, наклав на себе руки, наковтавшись сильнодіючих препаратів. Після цього ФБР вказало на нього як на «збожеволілого терориста», який розсилав листи з заразою. Розтин тіла не проводився, розслідування не було, і справу швидко закрили.

Цікаво, що він повторив долю одного з провідних мікробіологів 50-х років Френка Олсона, який також працював із сибіркою і подав заяву про відставку з Форта Детріка, не бажаючи брати участь у розробці смертельної зброї. І за кілька днів, у листопаді 1953 р., згідно з звітом ФБР, «у стані нервового зриву викинувся з 10-го поверху готелю «Пенсільванія».

Одним із найвідоміших випадків стало «самовбивство» найбільшого британського експерта з біозброї Девіда Келлі. У десятки разів у складі різних місій ООН він відвідав Ірак з інспекціями. Після вторгнення він виступив із сенсаційною (першою!) заявою про те, що всі «документи» про наявність у С.Хусейна хімічної та бактеріологічної зброї, представлені владою США та Британії в ООН і послужили приводом для війни – «грубі фальшивки». Його викликали до парламенту, де на слуханнях по суті не дали відкрити рота, накинувшись на нього з докорами та звинуваченнями.

А через кілька днів 17 липня 2003 р. він, як завжди, пішов на ранкову прогулянку, і його труп був виявлений наступного дня в милі від будинку. В офіційному висновку було сказано, що він наклав на себе руки, проковтнувши 30 таблеток снодійного, і потім ножем перерізавши собі вену на зап'ястя лівої руки. Але лікарі «швидкої» (мабуть, не знали про «замовлення») наголосили, що під трупом не було крові. Отже, Келлі отруїв себе, перерізав вену, а потім, знекровлений, сам дістався до того місця, де його виявили!

У США однією з найгучніших подій стала авіакатастрофа у березні 2002 р., у якій загинув Стівен Мостоу – провідний вірусолог, який працював у Колорадському центрі медицини. Його звали "містер Грип", оскільки в основному він спеціалізувався на цьому захворюванні.

Серед загиблих було чимало і вихідців із нашої країни, які з різних причин поїхали шукати щастя на Заході. Найпомітнішим був «серцевий напад» 2001 р. у мікробіолога В. Пасічника, який вирізнявся завидним здоров'ям. Захід використав його (як і багатьох інших росіян) на 200% - і як фахівця, і як «викривача страшних змов Кремля проти США та всього вільного світу».

У 1989 р. він поїхав до Англії і там працював в одному з вірусологічних центрів. Принагідно заробляв гроші вигадками про «бінарну біологічну зброю» Рад під назвою «Novichok», про те, що всі відомі віруси вже давно освоєні в секретних лабораторіях КДБ, і вже з'явилися нові. Вони можуть викликати у американців, що нічого не підозрюють, такі «жахливі хвороби» як склероз і артрит.

Ці страшилки були корисні, тому що давали привід для вибивання бюджетних коштів для «біозахисту» (насправді для розробки нових смертельних штамів). Але потім вирішили, що балакучий Пасічник надто багато говорить про вірусологічний центр у Сейлсбері, де він працював 10 років, і відправили в інший світ.

* * *

"Путінська ракета", "рука Москви", "Путін, ти вбив мого сина!" - такими заголовками замайоріли журнали та газети Заходу після того, як над небом України 17 липня цього року було збито пасажирський «Боїнг», який летів із Голландії до Мельбурну. Ця істерія почалася відразу після виступу президент США Обама, який заявив, що це - «злочин немислимих масштабів» і поклав відповідальність на Росію. Одразу в руках прес-секретарів Білого дому та Держдепу з'явилися якісь розмиті фотографії, які були отримані з ЦРУ і «незаперечно свідчили» про те, що лайнера було збито російською ракетою «Бук».

Ця подія стала приводом для повномасштабного розгортання економічних санкцій проти Росії, залучення до них країн ЄС (до катастрофи вони вагалися, чи варто підтримувати США), використання майже всіх заборонених засобів війни для придушення опору в Новоросії (включаючи фосфорні бомби, балістичні ракети, касетні ракети та ін), реалізації планів збивання антиросійського військового блоку за участю України, Молдови, Польщі, Грузії, прибалтійських країн.

Лише через місяць почали з'являтися матеріали про те, що пробоїни в кабіні пілотів та фюзеляжі доводять, що літак був збитий у повітрі, швидше за все, винищувачем ВПС України. Цю версію підтверджує і різка зміна маршруту Боїнга перед катастрофою. Проте, справа вже була зроблена, про літак всі західні ЗМІ відразу ж забули, а санкції та повномасштабна війна проти російського народу на сході України не тільки діють, а й продовжують посилюватися.

В наявності всі ознаки «пускової події» (trigger event) або «сфальшованого інциденту» (false flag incident) - так майстри провокацій із ЦРУ називають теракти, які покликані повернути громадську думку в потрібному для США напрямку, запустити ланцюг подій, що призведе до реалізації цілей "Імперії". Так було завжди в історії США – вибух свого ж лінкора «Мейн», який став приводом для оголошення війни Іспанії у 1898 р.; сплановане потоплення пасажирського пароплава «Лузітанія» для вступу у вигідний момент у першу світову війну; свідоме замовчування інформації про напад японців на американську базу в Перл-Харборі в 1941 р. для вступу в другу світову війну; провокація з обстрілом американського есмінця «Меддокс» у Тонкінській затоці для оголошення війни В'єтнаму 1964 р.; вибух веж-близнюків у 2001 р. для початку «війни з тероризмом» та підготовки до вторгнення до Іраку та Афганістану.

Як часто буває у таких терактах переслідується не одна, а кілька цілей. В даному випадку, великий інтерес представляє інформація про те, що на борту MH17 знаходилося понад сто мікробіологів, які летіли на міжнародний конгрес зі СНІДу в Австралії. І серед них – Дж. Ланге, провідний вірусолог Амстердамського університету.

«Незаймана втрата найбільшого провидця і титану у вивченні СНІДу», «трагічна загибель провідного світового фахівця з лікування хвороби століття» - так було написано в некрологах, опублікованих у наукових журналах. І, дійсно, лабораторія Ланге займала лідируючі позиції у вивченні СНІДу та способів його лікування, включаючи комбіноване застосування ліків, антиретровірусної терапії, розробила способи запобігання передачі вірусу від матері дитині. Протягом кількох років (2002–2004) він очолював міжнародну організацію боротьби зі СНІДом. Разом з ним на борту були його голландські колеги Жаклін ван Тонгерен, М.Адріана де Шуттер, Л. Ванн Менс та інші вчені. Не виключено, що вони везли з собою результати багаторічної роботи, можливо, навіть довгоочікувані ліки від цієї жахливої ​​хвороби - адже незадовго до конференції співробітники Ланге говорили, що його виступ має зробити сенсацію в науковому світі.

У тому ж Боїнгу (нібито за фатальним збігом обставин) летів представник Всесвітньої організації охорони здоров'я (ВООЗ) Гленн Томас, який «проштрафився» тим, що дав інтерв'ю, де обмовився про злочинну роль своєї організації у поширенні епідемії Еболи на заході Африки.

Знищивши європейських дослідників СНІДу, а також чесного функціонера ВООЗ американці зробили тим самим урок усім тим, хто щиро докладає сили для лікування СНІДу та Еболи: «Не треба лікувати і запобігати цим хворобам, вони нам дуже корисні для знищення людського зброду, що розплодився».

Невипадково у низці статей згадували, що у 1998 р. над Атлантикою зазнав катастрофи літак компанії Swissair, у якому перебував одне із блискучих дослідників СНІДу Джонатан Манн зі своєю дружиною М. Л. Клементс, також відомим вірусологом. Манн очолював структуру ВООЗ, призначену для боротьби зі СНІДом, і, як писали його колеги, його смерть завдала потужного удару по всіх планах організації боротьби з цією страшною хворобою. Причини катастрофи не з'ясовані досі (ніхто із серйозних експертів не вірить в офіційну версію про те, що в одного з пілотів упав недопалок сигарети, і це викликало пожежу внутрішньої обшивки літака).

* * *

США використовують проти нас величезний арсенал біозброї: ГМО та трансгенні рослини та організми (багато з яких за свідченням західних експертів викликають придушення імунної системи, рак, безпліддя та захворювання мозку), організують щороку десятки епідемій нових вірусів грипу, захворювання тварин («свинячий» та «пташиний грип»), рослин, що поширюють різні алергічні хвороби, продають ліки та вакцини з невідомими нам «побічними ефектами», харчові добавки тощо. основу віспи, нове покоління «несмертельних» (лише повністю «виводять з ладу») хвороб, «біорегулятори», здатні в масових масштабах створювати депресії, змінювати серцеві ритми, призводити до безсоння. Ймовірно, що створюються біологічні «закладки» - латентні віруси, які мають активуватися через певний час.

Навколо Росії створюються американські військові біолабораторії: у Грузії (звідки, як вважають експерти, 2013 року пішла епідемія «свинячої лихоманки»), Казахстані, Киргизії, Прибалтиці. Влада США виділяє величезні кошти як на розробку нових вірусів, так і на біозахист (тільки на програму «Біощит» щорічно витрачається понад 6 млрд доларів).

У нас після краху Радянського Союзу довгий час майже не приділялося уваги цьому найважливішому напрямку захисту країни. Інститути та центри закривалися, молоді фахівці виїжджали на Захід. Залишилися лише ентузіасти та літні вчені, які працюють на мізерну зарплату (18 тис. – старші наукові співробітники, 27 тис. – професори, доктори наук).

Обшарпані будинки, застаріле обладнання, «дотискання» з боку ліберальних чиновників. Дійшло до того, що у 2000 р. за «недоплату» чубайсівське «Мосенерго» спробувало відключити електроенергію в Інституті вірусології імені Івановського. Мало того, що було б знищено унікальну колекцію мікроорганізмів, але ж частина зразків вірусів могла вирватися в атмосферу! Тоді лише дивом вдалося відбитися від «ефективних менеджерів». І останній за часом удар завдала «реформи» РАН – насправді її ліквідація та передача управління до рук «ефективного» бухгалтера з Красноярська.

Ніхто не перешкоджав справжньому полюванню агентів ЦРУ на вчених-патріотів, яких просто знищували на території нашої країни! У січні 2002 р. був забитий бейсбольними бітами (щоб знали, звідки прийшов наказ про ліквідацію!) та задушений у під'їзді свого будинку в Москві член-кореспондент РАН, директор Інституту психології А. Брушлинський, психолог та біолог, автор праць з розпізнавання терористів. Через два роки після його загибелі було вбито його заступника - професора В. Дружиніна.

У листопаді 2002 р. було застрелено професора Б. Святського - спеціаліста з дитячих інфекцій з РДМУ ім. Пирогова. Член-кореспондент РАМН, найбільший вірусолог та мікробіолог, фахівець із біозброї Л. Страчунський, був забитий у 2005 р. бейсбольними бітами у своєму номері в московському готелі «Слов'янка». У 2006 р. був убитий генетик та біолог, член-кореспондент РАН Л. Корочкін.

Величезною втратою для вітчизняної мікробіології стала смерть завідувача кафедри мікробіології РДМУ, професора В.Коршунова, одного з провідних у світі вірусологів, визнаного фахівця з біологічної антизброї. 56-річного вченого «невідомі хулігани» забили бітами у 2002 р. за кілька днів після виходу у світ газетної статті, в якій говорилося, що вчений стоїть на порозі найбільшого відкриття – універсальної вакцини проти будь-якої біозброї! В результаті загибелі Коршунова було зупинено роботу з найважливішого напряму науки. Сотні, якщо не тисячі людей у ​​Росії через зупинку досліджень виявилися приреченими на смерть.

Трагічні сторінки сучасної історії переконують у тому, що США здатні на будь-які, найбільш варварські та злочинні дії у своєму маніакальному прагненні до світового панування. Показово, що країни, куди вони вторгаються під приводом «захисту прав людини», «гуманізму», «демократії», стають не лише ареною найгостріших громадянських воєн, а й супроводжуються епідеміями різних нових, невідомих раніше хвороб. Величезні маси людей у ​​В'єтнамі, Югославії та Іраку були піддані впливу мутагенних речовин, які призвели до жахливих наслідків. Страшні потворності серед немовлят, створення цілого покоління дегенератів, незворотні зміни на генетичному рівні, які позначатимуться на всіх майбутніх поколіннях – ось деякі з наслідків «гуманітарних акцій».

Причому міжнародні організації, в тому числі й ООН, що знаходяться в даний час під повним контролем США відіграють роль «прикриття» у здійсненні цього геноциду. Всесвітня організація охорони здоров'я (ВООЗ), «Доктора без кордонів», інші, насамперед авторитетні, органи пишуть свої «об'єктивні звіти» під диктування Заходу, і їм тепер не можна довіряти. Вони діяли в одній зв'язці з агресорами в Іраку, Афганістані, Лівії.

Напередодні вторгнення США до Іраку вони слухняно дали висновок про те, що С. Хусейн має «величезні запаси біологічної та хімічної зброї», що послужило для США одним із головних аргументів для розв'язання війни. Минулого року вони звинуватили сирійський уряд у використанні хімічної та біологічної зброї проти свого народу, коли близько 300 людей загинули у серпні від нервово-паралітичного газу зарину у передмісті Дамаска. Хоча на той час були отримані вагомі докази того, що зарин застосували бойовики з Аль-Каїди, і він був отриманий не звідкись, а з американських складів.

* * *

Безжальне знищення конкурентів та, по суті, біологічна тиранія США знищує суверенітет периферійних країн світу, змушує їх покладатися на допомогу, експертизу, ліки з-за кордону. Така колоніальна залежність підриває безпеку народів, робить їх заручниками Заходу, «піддослідними пацюками» для різних медичних та біологічних експериментів, спрямованих проти їхнього здоров'я та життя

Противагою імперії біотерору може бути лише відмова від порочного «глобалізму», будівництво багатополярного світу. Усі країни повинні, крок за кроком, відмовлятися від співпраці зі США та НАТО, існуючими проамериканськими міжнародними організаціями. Потрібно укладати угоди на міждержавному рівні. Так, в Африці держави мають спільно боротися із новими занесеними штамами лихоманки Ебола. У Південно-Східній Азії – проти найгострішого нового синдрому «атипової пневмонії». Саме на національному рівні треба дбати про свою науку, створювати свої національні інститути та лабораторії, потужні наукові центри для протидії вірусній та генетичній зброї.

Микола Іванов

Етапи лабораторної діагностики вірусних хвороб. Влаштування вірусологічної лабораторії.

1) Індикація (виявлення) вірусу в патматеріалі:

Експрес-методи:

a) Виявлення віріонів:

(1) Електронною мікроскопією;

(2) Світловою мікроскопією (віспа);

b) Виявлення вірусних АГ у серологічних реакціях (РІФ, ІФА, РЗК, РДП, РНГА);

c) Виявлення тілець-включень методами світлової та люмінесцентної мікроскопії;

d) Виявлення вірусних нуклеїнових кислот методами ПЛР, ДНК-зондів;

e) Виявлення гемаглютинінів у РДА;

f) Виявлення інфекційної активності вірусу в біопробі.

2) Ізоляція (виділення) вірусу з патматеріалу. Ізоляцію проводять незалежно від результатів першого етапу методом біологічної проби у трьох «сліпих» пасажах. Пасаж- Це зараження живої системи, з метою отримання нової популяції вірусу. «Сліпий» пасаж- Зараження без видимих ​​ознак репродукції вірусу. Через три пасажі у клітинах живої системи відбувається накопичення вірусу, що супроводжується появою ознак репродукції, які видно на рівні макроорганізму. Наприклад, при біопробі на тварин: клінічні ознаки, загибель, патизміни; на курячих ембріонах– загибель, патизміни, гемаглютинація; на культурі клітин- ЦПД, гемадсорбція, бляшки, РІФ та ін. Такі заражені живі системи визначають як позитивна біопроба. Однак точно встановити вид інфекційного агента ще не можна. Тому позитивної біопроби відбирають патологічний матеріал, який умовно вважають вторинним, тобто. відібраним із живої системи з ознаками позитивної біопроби. З нього готують суспензію, що містить вірус, або мазки-відбитки (виділений вірус).

3) Ідентифікація (визначення виду) виділеного вірусу в серологічних реакціях чи методом ПЛР-аналізу. У поодиноких випадках можлива ідентифікація за іншими ознаками, наприклад, за внутрішньоклітинними включеннями (тільця Бабеша-Негрі для сказу).

4) За потреби – доказ етіологічної ролі виділеного вірусу. Для цього застосовують серологічні реакції, в яких як антиген використовують виділений вірус і як антитіл - парні проби сироватки крові в дворазових послідовних розведеннях. Позитивним результатом, що доводить етіологічну роль виділеного вірусу є збільшення титру антитіл у другій пробі сироватки крові в порівнянні з першою в 4 і більше разів.

5) Ретроспективна діагностика. З цією метою використовують парні сироватки крові, взяті на етапі одужання, які досліджують у серологічних реакціях зі стандартним специфічним антигеном відповідно до попереднього діагнозу на вірусну хворобу. Наростання в 4 і більше разів титру антитіл у другій пробі порівняно з першою свідчить про активний інфекційний процес, що протікає в організмі тварини в період взяття крові. При цьому хвороба викликана тим вірусом, якого встановлено підвищення титру антитіл у парних сироватках.

Влаштування вірусологічної лабораторії.

Для організації діагностичної лабораторії використовують ізольований відсік, що складається не менше ніж із 5-6 кімнат.

Під лабораторію відводять світло приміщення. Кімнати для роботи з вірусним матеріалом повинні бути добре освітлені та складатися з передбоксника та боксу, розділених скляною перегородкою з дверима. У боксах розміщують лише столи, стільці та приладдя для роботи. Поверхня столів покривають нержавіючою сталлю, пластиком чи склом, а над робочою поверхнею встановлюють бактерицидні лампи. Біля входу в бокс кладуть гумовий губчастий дезковрик, просочений дезрозчином. У передбокснику лежать стерильний одяг та обладнання, що відповідає призначенню боксу. Лабораторію забезпечують холодною та гарячою водою та вентиляцією з подачею стерильного повітря.

Для реєстрації патматеріалу, що надходить, призначена приймальня,де розміщують кілька столів, оббитих оцинкованою бляхою, та ємності з дезрозчинами (3% хлораміну, натрію гідроксиду або 5% фенолу).

У кімнаті для попередньої обробки матеріалу ( викривальної) розкривають трупи та відбирають матеріал для подальшого дослідження.

Кімнати-бокси обладнують залежно від призначення.

В автоклавній стерилізують посуд, живильні середовища, апаратуру, живильні середовища та знешкоджують інфекційний матеріал. Необхідно мати два автоклави: для чистих матеріалів та для інфікованих.

Мийна призначена для миття посуду, апаратури та приладів.

Віварій повинен мати карантинне відділення, кімнати для здорових та експериментальних тварин та підсобні приміщення.

Для вірусологічної лабораторії будь-якого типу обов'язковою частиною лабораторії є настільний бокс або краще бокс із ламінарною подачею повітря.

46. ​​Культури клітин та їх види.Система у якій клітини, тканини чи органи вилучені з організму зберігають свою життєздатність щонайменше 24 годин. Переживаючі: у яких клітини тільки зберігають властиву їм життя без розмноження. Зростають: зберігають властиву їм життя діяльність і здатні до проліфірації. За характером ростуть діляться на 3 групи: суспензійні; плазмові (культури фіксованих шматочків тканини); одношарові. Одношарові діляться на 4 групи: первинно-трипсинізовані; субкультури; напівперевиваються та перевиваються. Суспензійні:ростуть у вигляді суспензій, клітини розмножуються зі спеціальним середовищем плюс постійне перемішування використовують ролери. Клітини ростуть по всій поверхні матраца. Велика кількість клітин для вакцин. Плазмові:шматочки тканини фіксовані плазмою, це тканинна культура. Її отримують шляхом фіксації шматочка тканини на склі вірусологічного посуду, потім додають середовище і культивують; при цьому зростання клітин реєструють по переферії шматочка тканини. Використовують для одержання шматочків тканини. Одношарові: для індикації вірусу З тканин або органів отримана шляхом обробки їх трипсином. Субкультури одержують з первинних шляхом перевивання. Далі напівперевиваються шляхом багатокрвтних перевивань. Вони мають диплоїдний набір хромосом. Може витримати диплоїдні залежно від віку або тканини, з якої отримували клітинну культуру. Якщо ембріон – до 80 днів. Дорослого – не більше 25 перевивань. Старого не більше 5. Перевиваються – це ті ракові, що мутували клітини. Вони витримують нескінченну кількість разів. Це трансформовані клітини – ракової пухлини. Hela - найвідоміша клітина, що перевивається, з 1956 року. Ця культура є у всіх лабалоторіях світу. Вона пристосована до багатьох збудників. Первинні мають низку переваг: не гинуть; вища інтенсивність зростання; вони всі генетично однорідні. У лаболпториях їх підтримують шляхом пересівання з однієї судини в ін.

59. ЦПД.Це спосіб індикації вірусу в клітинній культурі. ЦПД називають будь-які зміни клітин у культурі клітин під впливом вірусу, що розмножується в них. Використовую мале величі під час розгляду верхнього шару матраца. Порівнюють заражені клітини з незар. Відмінності можуть захоплювати вест моношар або тільки ділянками. Оцінюють у кристалах чи балах. Так якщо зміни піддався весь мономлою ЦПД оцінюють на 4 хрести; якщо - на 3 кр; ½ на 2 кр; ¼ – на 1 хрест. Форми цпд залежить від біологічних властивостей вірусу, виду клітин, дози зараження, умов культивування тощо. Одні віруси виявляють ЦПД через 2 - 3 діб, інші через 1-2. 3 форми ЦПД: франментація- руйнування клітин на окремі фрагменти, які відокремлюються від скла та переходять у культуральну житкість. Округлення- Втрата клітинами здатності прикріпляться до скла, вони набувають кулястої форми, відокремлюються і вільно плавають де і гинуть. Сімпластоутворення- Розчинення клітинних оболонок, внаслідок чого цитоплазми сусідніх клітин зливаються, утворюючи одне ціле, в якому розташовані ядра клітин. Такі освіти зв симпластами - гігантські багатояди кл. Необхідно провести не менше 3 сліпих пасажів для того, щоб судити про наявність вірусу в досліджуваному матеріалі. Гемадсопбція - з'єднання еритроцитів з поверхонь уражених вірусом клітин.

51. Розрахунок титру вірусу за Рідом та Менчем.Титрування вірусу зі статистичним ефектом, що оцінюється з розрахунком титру по ріду і мінчу. Для цього методу титрування можна використовувати будь-яку біологічну модель але ця модель повинна бути чутлива до вірусу, що титрується (клітинні культ; ембріони; лаб тварини). За інфекційною дією заражених біологічних моделей ділять за такими ознаками: за клінічно визнання; за патоморфологічною змінено; щодо загибелі моделі; з накопичення гемаглютиніну. Від дози вірусу залежить результати роботи. Встановлено що доза вірусу інфекційний ефект, що викликає 50%, найменш схильна до коливань і є найбільш визначається з усіх можливих доз. Титр виявляється в ефективних 50% дозах. Це ЕД 50. Залежно від використовуваної біологічної моделі та від отриманого ефекту 50% доза може виражатися в наступних одиницях: ЛД 50 - ВД 50 ЕЛД 50 ЕІД 50 ЦПД 50– це 50% цитопатогенна доза, що визначається на клітинних культурах по цпд. Якщо в заражених системах ми не спостерігаємо 50% ефекту ті ІД 50 то титр розраховуємо по ріду і мінчу: lg ЛД 50 = lg ВКД - (% років ВКД - 50%) / (% років ВКД - % років НКД) ВСЕ ЦЕ ПОМНОЖЕНЕ lg кратності разів

36. Правила та режим роботи у вірусологічній лаболаторії.Усі студенти проходять інструктаж та навчання безпечним методам тр. Вхід у виробниче приміщення сторонніх осіб і вхід без халата і змінного взуття заборонено. Заборонено виходити за межі лаб у халаті та шапочці. Курити, приймати їжу в лаб та зберігати продукти харчування. Весь матеріал, що надходить у лаб, повинен розглядатися як інфікований. Після закінчення роботи робоче місце упорядковують і ретельно деценфікують. Маркування посуду, що містить інфекційний матеріал. Руки в рукавичках промивають у банці з 5% роствором хлораміду, потім рукавички знімають і знезаражують втрічно, дезенфікують і миють. ра робота вірусолог лаболаторії будується на трьох основних принципах:не допустити зараження співробітників або людей, які працюють з вір вмістом матеріалом. Не допустити контамінацію матеріалу (інструменти, посуд стерильні) прибирання приміщень з дез розчином + ультофіолетів лампи. Не допустити винесення вірусу за межі лаб (з повітрям, посудом, твердим та житким матеріалом). Піпетки, скла необхідно скидати у стерилізатор. Пробірки з вірусами, тканини – автоклав. Забороняється відкривати центрифугу доки вона не зупиниться. Видаляти повітря зі шприца потрібно лише у ватний тампон із 75% спиртом. Забороняється провітрювати приміщення система вентиляції із фільтром.

37. Техніка безпеки з вірусом матеріалом.Не допускати розсіювання вірусів у зовнішньому середовищі. Запобігти контамінації (забруднення) вірусомісткого матеріалу сторонньою мікрофлорою. Забезпечити особисту безпеку. Для дотримання цих вимог необхідно наступні правила роботи: бути уважним зібраним та акуратним; бути тільки в халаті і переодягатися в гардробі; працювати тільки із застебнутими манжетами в шапочці та марлевій масці; у лаболаторії суворо дотримуватися чистоти та порядку; на робочому столі повинно бути ніяких сторонніх предметів; забороняється курити та приймати їжу. Користуватися стериними інструментами та посудом. Працювати з судинами у полум'я пальника. Чи не брати пальці в рот. Відпрацьовані прилади у стерилізатор. Відпрацьовані піпетки збирати в посудину з розчином дез. Тверді або житкі відходи (вата) збирати в спеціалізовані контейнери для подальшого знезараження. Забороняється виливати відходи у раковину чи унітази.

33. Механізм противірусної дії інтерферону.Безпосереднього на вірус інтерферон не надає. Впливає лише на клітину, активізуючи синтез деяких клітинних ферментів. Зокрема ферменту протеїнкінази та 2,5 олігоасинтетази. Інформація про синтез даних ферментів знаходиться також у певних ділянках генів клітини і також у репресивному стані. Під повітря інтерф відбувається дерепресії генів відповідальних за синтез протеїнкінази і 2,5 абогоасинтетази. І їхній синтез різко збільшується. 1) під повітря протеїнкінази відбувається фосфорування ініціюючого фактора який забезпечує зв'язування з рибосомою вірусної інформаційної РНК. Таким чином вірусна інформаційна РНК не може зв'язатися з рибосомальним апаратом клітини, тобто початок трансляції. І зрештою синтез вірусних білків і ферментів стає неможливим. 2) під впливом інтерферону активується синтез 2,5 олігоасинтетази яка каталізує синтез у клітині 2,5 олігоаденілової кислоти. Ця кислота перемикає дію клітинних нуклеаз на руйнування вірусних інформаційних РНК. Таким чином, під впливом інтерферону відбувається: блокування трансляції вірусних інформаційних РНК; руйнування вірусних інформаційних РНК. Інгібуюча дія інтерферону на розмноження клітин: інтерферон у концентрації від й0 до 1000 одиниць у мл пригнічує розмноження найрізноманітніших клітин у будь-яких тканинах. Інтерферон регулює зростання клітин багатьох типів, включаючи первинні клітинні культури, пухлинні клітини. В основі лежить пригнічення синтезу деяких клітинних білків та синтезу нових білків інтерфероном. Інтер підвищує кілерову активність Т-лімфоцитів. У великих дозах пригнічують освіту антитіло. Невеликі дози навпаки стимулюють освіту антитіло. Крайлінг - клітини оброблені невеликими дозами інтерф утворюють більше інтр ніж необробки. Надто великі дози – зворотний процес.

35. Типи взаємодії вірусу із клітиною.Продуктивний та абортивний. Продуктивний ділиться на літичний та латентний. Продуктивний:це такий тип взаєм, при якому в клітині утворюється нове покоління віріона. Якщо після образів пок віріона клітина швидко гине то це продуктивний літичний шлях взаємодію вірусу з кл. якщо клітина в якому вірус тривалий час зберігає свою життєздатність (шляхом брунькування) то це продукт латентний тип взаємодій. Абортивний:це тип взаєм при кіт репродукція віріонів припиняється на будь-якій стадії, вір інф не розвивається. В результаті взаємодії з клітин в клітині можуть відбуватися наступні зміни: дегенерація клітин- Клітини спочатку перетворять неправильну форму потім округляються, в цитопл з'являється зернистість потім фрагментація ядра потім загибель клітини. Такі зміни звуться ЦПД. У хрестах: 4 хрести – 100% цпд. Освіта симпластів- Багатоядерних клітин. Утворення тілець включень- мб внутрішньоядерні та плазматичні, рНК або ДНК містять. Трансформація клітин- Онкогенні віруси (ретровіруси рНК). Розмноження у клітині онкогенних вір не супроводжується ЦПД. Клітина утворює вірус постійно. Синтез інтерферону.

4. Стійкість вірусів до фізико-хімічних факторів. Стійкість вірусів тварин порівняно добре вивчена при дії зовнішніх факторів: темп, випромінювань, ультрофіол, ультрозвук, рН, формалін, фенолу та ін. Для захисту від цих дій у віріонів є білкова оболонка. Різна будова і хімічний склад білкових оболонок зумовлює неоднакову стійкість вірусів. Залежно від цих особливостей той самий чинник може руйнувати одні віріони повністю, а інші немає. Наприклад органічні розчинники: ті віріони в оболонках яких немає ліпідів стійкі до цих речовин а липодовмісні швидко руйнуються. Інактивація вірусів означає повну або часткову втрату їх біологічної активності, яка настає в рез дії фізико-хімічних факторів. При зміні вірусної нукл кисл і білка настає повна інактивація тобто втрата всіх біологічних властивостей вірусу – він втрачає лише інфекційні властивості та зберігає імуногенність. Характер і ступінь агентів хіміко-фізичної природи, що діє на вірус, залежить від природи інактивуючого фактора, від дози, тривало, від виду вірусу. При інактивації вірусу може відбуватися розщеплення білків оболонки з наступним розпадом її на окремі одиниці або ущільнення білків зі збереженням загальної структури оболонки. Розщеплення спостерігається при дії кислого та лужного середовища при тривалому та слабкому нагріванні. Коагуляція та ущільнення відбувається при впливі на них формальдегіду, високий темп або фенолу. Залежить від концентрації та тривалості. Таким чином в одних випадках коагуляція білків оболонок сіржується руйнуванням нукл кислів і у вірусунаступає незворотна втрата інфекційності. В інших випадках вірусний еукл кислий здатність до репродукції зберігається. Консервують гліцерином.

60. ПЛР.Принцип методу: виявляють специфічний для даного вірусу ген - ділянка молекули ДНК, що несе інформацію для синтезу одного білка. Цей ген потім ідентифікують у досліджуваному матеріалі за допомогою ПЛР. Ця реакція дозволяє утворювати додаткові копії гена – ампліфікувати ділянку ДНК у пробірці. Залежно від мети дослідження можна виявити вид або род мо. Суть пцр: молекулу ДНК нагрівають до 90-94 град. Що веде до руйнування водневих зв'язків між азотистими основами подвійної спіралі, а потім охолоджують до 52 гр у присутності ферменту ДНК полімірази. Подальше підвищення темпів призводить до синтезу нової молекули ДНК - компліментарної матричної. Цю процедуру повторюють багаторазово, внаслідок чого фрагменти збільшуються. Індикацію проводять за допомогою електрофорезу або міченого зонда ДНК. Основні компоненти: ДНК поліміразу термостабільна; олігонуклеотид із 20 нуклеотидів; трифосфати; ампліфікатор, посуд та реактиви для елнектрофорезу в агарозному гелі. Постановка: одержання ДНК зразка. Для цього матеріал, що досліджується, суспендують у буфері або дистил воді. Додав натрій ВІН і витримують 7 хв. Суміш нейтролізують. Лізат центифугують протягом 10 хв для осадження великих часток.надосадочную житкость використовують для постановки пцр. ПЦР - ампліфікація заданого гена фрагмента ДНК. Далі плавлять в ампліфікаторі 3:00. Індикація ампліфікату - пробу піддають електрофорез в агарозному гелі для поділу ДНК. Через 30 хв агарозу полімізується в апараті, при цьому в агарозі утворюються лунки. відбирають 10 мкл суміші та змішують з 5 мкл барвника. Суміш вносять у лунки та проводять електрофорез 40 хв. Плпстинку виймають і 10 хв забарвлюють у розчині броміду. Потім агарозу поміщають на трасиллюмінатор і фотографують отримані картини смуг. Смуги виявлені при ультрах випромінювання – це фрагменти ДНК.

49. Метод зараження клітинних культур. Індикація вірусів у культурах клітин.Зараження: для цього відбирають пробірки із суцільним клітинним моношаром. Ростове пиття середовище зливають, клітини кілька разів промивають розчином хенкса. У кожну пробірку вносять по 0,2 – 0,1 млвірус матеріалу і похитуванням рівномірно розподіляють по всьому шару клітин. У такому вигляді пробірки залишають від 1 до 2 години при 22 або 37 град для адсорбції вірусу на поверхні клітин. Потім віруссод матеріал видаляють з пробірок і наливають середовище, що підтримує, в пробірку 1-2 мл. моношар клітин після виділення вірусу відмивають 2 рази розчин хенкса і потім наливають підтримуюче середовище. Індикація:з ЦПД; РДАд; за освітою бляшок; внутрішньоклітинних включень; РІФ; електронною мікроскопією

54. РТГА. РДА. Ртга: суть- при змішуванні вірусу зі спеціальним сир сир вірус втрачає свої гемаглютинуючі властивості. Цілі- Ідентифікація виділеного вір; виявлення антитіл у досліджуваній сироватці та їх титру. Компоненти– для прямого сероваріанту: матеріал, що містить вірус, спецефічна сироватка, 1% завись еритроцитів, фіз розчин для розведення. Для ретроспективного – досліджувана сироватка, стандартний антиген у певній дозі 4 ГАЄ (титр вірусу розведення) 4 гаї – 1:32. Схема- до кожного розведення сироватки додають рівний обсяг стандартного антигену (вірусу) в дозі 4ГАЕ. Контакт 30 хвилин при кімнатному темпі. У кожну лунку з розведеннями сироватки і постійною дозою вірусу в 4 гаї додаємо рівний об'єм суспензії еритроцитів. Контакт 30-60 хв при кімн темп. Облікреакції проводять у кристалах. якщо плюс то аглютинації немає, якщо хвилин гемаглютинація. Титр антитіл у досліджуваної сироватки – це максимальне розведення сироватки, яке повністю затримує аглютинацію еритроцитів.РДА: суть: в адсорбції вірусу на поверхні еритроциту, що призводить до склеювання. Цілі: індикація; для титрування вірусу в гаєн. Компоненти: вірус; 0.5 завись еритроцитів; фіз розчин для приготування. Схема пост: готують дворазове розведення вірусу; до кожного разу вірусу доб рівний об'єм 0.5% суспензії еритроц; контакт 30-60 хвилин при комнт тепм. Облік: у кристалах. 4 кристи – 100% аглютинація. 3 криста - 75%. 1 хрест – аглютинація. 1 гаєн це максимальне розведення вірусу здатне викликати аглютинацію 50% еритроцитів.

57. ІФА.Суть: при зв'язуванні антигену+сироватка мічена, фермент розкладає субстрат. Утворюється комплекс антиген+коньюгат з утворенням кольорового продукту реакції, що оцінюється під світловим мікроскопом або візуально. Ціль: ідентифікація. Компоненти: вірус сод матеріал, кон'югат, субстрат. Схема постановки: куліткру клітин фіксують охолодженим ацетоном. Висушують та наносять на них коньюгат. 1-2 години інкубують при темпі 37 гр у вологій камері. Промивають фіз розчином, споліскують дистил водою і висушують. Наносять на нього дек крапель розчину субстрату, 5-10 хв інкубують потім промивають у фіз раст і споліскують дтст водою. Облік: покладе випадок тобто за наявності антигену після нанесення кон'югату утворюється комплекс антиген плюс антитіло мічений ферментом. Після нанесення субстрату розкладається за дією ферменту, утворюючи кольоровий продукт добре видно у світловому мікроскопі.

56. РЗК.Суть: у зв'язуванні компліменту із комплексом антиген плюс антитіло. Про відсутність вільного компліменту у цій системі судять із затримки гемолізину в індикаторній системі. Цілі: ідентифікація; виявлення антитіл та їх титру у досліджуваної сироватки крові. Компоненти: 2 системи - 1) (віруссодержащий матеріал; спецефічна сироватка;) (досліджувана сироватка; страндартний антиген). 2) гемолітична система (індикаторна) - 2-3% завись еритроцитів барана це антиген; гемолізин (гемолітична сироватка) - це антитіла. Антитіла відповідають антигену. І комплімент лише на 1 реакцію:якщо на першу то буде затримка гемолізу, коли комплімент зв'яжеться з досліджуваною системою. Якщо на другу, то еритроцити лізуються буде повний гемоліз. Схема постановки: реакцію ставлять спочатку в досліджуваній системі, потім в цю ж пробірку додають індикаторну систему. Облік: позитивна РЗК – затримка гемолізу. Негативна – повний гемоліз.

7. Вірусні білки. Складаються з амінокислот. Склад вірусного білка залежить від порядку чергування амінокислот, цей порядок визначається генетичною інформацією, закадованою у вірусному геномі. Вірусні білки ділять на структурні та неструктурні. Структурні білки входять до складу зрілих віріонів. Неструктурні б не входять до складу зрілих віріонів, але є обов'язковими на певних стадіях репродукції. СтруктурніНеструктурні

8. Вірусні ферменти. Мають білкову природу. Вони можуть бути пов'язані безпосередньо з віріоном амб не пов'язані - не структурні. у ДНК У РНК:РНК залежна ДНК поліміразу – у клітині його немає, потрібен для “-” містять РНК і ДНК, що містять у вір сімейства ретровіриди фермент трансгібуючий вірусний геном називається РНК залежні ДНК полімірази. Цей фермент має назву: ревертазу, зворотну транскриптазу. Ферменти, що беруть участь у формуванні вірусних білків: протеази, протеїнкеназу.

52. РН.Суть:при взаємодії вірусу зі специфічною сироваткою вірус втрачає свої інфекційні властивості, здатність розмножуватися в клітинах. Цілі:ідентифікація виділеного вірусу, виявлення антитіл у сироватці крові та титр антитіл. Компоненти:вірусомісткий матеріал, спецефічна сироватка, біологічна модель. Якщо ретроспективний: сироватка крові, що досліджується, стандартний антиген, біологічна модель. Загальна схема постановки: змішують антиген та антитіло, контакт 30-40 хвилин, максимум 2 години при температурі 37-38 нрадусів; сумішшю антиген плюс антитіло заражають біологічну модель; спостереження та облік. Облік:позитивна РН – живі, негативна – загинули.

53. РДП.Суть:однойменні антиген і антитіло вміщені на однаковій відстані один від одного в агаровому гелі дифундують на зустріч один до одного утворюючи в місці зустрічі преципітату у вигляді білої смуги. Цілі:ідентифікація виділеного вірусу, виявлення антитіл досліджуваної сироватки. Компоненти:вірусомісткий матеріал, спецефічна сироватка, агаровий гель. Для ретроспективної: сироватка крові, що досліджується, стандартний антиген, агаровий гель. Схема постановки:готують агарові покриття на предметному склі, готують лунки колодязі, вносять компоненти реакції в лунки колодязі за певною схемою, скло з поставленою реакцією поміщають у термостат 37-38 С. Облік реакції через 48 годин. Позитивна реакція – утворення білої лінії преципітації.

55. РДАд, РТГАд. РДАд: Суть:в адсорбції еритроцитів лежить на поверхні заражених вірусом клітин. Цілі:індикація вірусу. Компоненти:заражена вірусомістким матеріалом клітинна культура; завись еритроцитів . Схема постановки:попередньо заражають одношарову клітинну культуру досліджуваним матеріалом. Культури зливають у середовище, що підтримує піт. Відмивають розчином Хенкса. Вносять завись еритроцитів. Контакт 5-15 хвилин при кімнатному темпі. Облік:проводять під світловим мікроскопом. Позитивна – еритроцити адсорбовані на клітинах; негативна – еритроцити вільно плавають. РТГАд: суть: у зв'язуванні специфічних антитіл з поверхнею заражених вірусом клітин, що призводить до гальмування адсорбції на клітинах еритроцитів. Цілі:ідентифікація виділеного вірусу Компоненти:заражена клітинна культура; спецефічна сироватка; завись еритроцитів. Схема постановки:попередньо заражають одношарову клітинну культуру одношаровим вихідним вірусним вмістом матеріалом. Зливають в підтримуюче середовище і вносять 0.8 мл спецефічної сироватки. Контакт 20-30 хвилин. Додають завись еритроцитів. Контакт 5 – 15 хвилин. Облік:для контролю обов'язково ставлять РДА. Облік у досвідчених прбірках: позитивна - еритроцити вільно плавають, негативно-еритроцити теж вільно плавають. Облік у контрольній пробірки при позитивній – адсорбція, що негативно-вільно плавають.

6. Вірусні нуклеїнові кислоти.+ РНК – це вірусні нукл кислоти, що мають функцію та інформаційну РНК. Інформація на білок синтезуючої системи у РНК+ одразу передається геномній РНК без транскрипції. -РНК містять віруси це віруси з - односпіральної РНК яка не володіє функцією інформаційної РНК, у таких вірусів синтез інформаційної РНК (транскрипція) відбувається на матриці мінус нитки геномної РНК за допомогою вірусспецефічного ферменту тісно пов'язаного з гномною РНК, РНК залежної РНК полімірази. Існують віруси, що містять як плюс нитки РНК так і мінус, до них відносяться аденовіруси, параміксовіруси. Геномна інформація у двоспіральних ДНК кодується на обох нятях. Нуклеїнові кислоти представлені полінуклеотидами сост з окремих нуклеотидів. Кількість їх у нукл кислоті по-різному. Кожен нуклеотид складається з 3х субедениць: залишок фосфорної кислоти, вуглевод, азотна основа.

9. Структура вірусів. Основні форми. Типи симетрії. Структура: ДНК: найчастіше двоспіральні, ген інформація кодується на обох нитках. Вірусні ДНК можуть бути розташовані лінійно, кільцевим способом. Можуть бути односпіральні. Вірусні РНК: частіше односпіральні, рідше за два. Розташовуються лінійно, кільцевим способом, фрагментовано. Зазвичай складаються з 11-12 фрагментів. Односпіральні віри РНК можуть бути вдих типів: плюс нитки і мінус ниткоподібні РНК (негативний геном). Спіральнийце тип при якому капсомери розташовуються навколо нукл кислоти спірально. Такий тип цим мають великі віруси і деякі вір середніх розмірів. Форма: паличкоподібні, полівидні, куляста, овальна форма. У вірусів мають паличок форму капсид складається з капсомерів покладених навколо нукл кислоти спіральними витками одного діаметра тісно прилеглих ін до ін. Кубічний тип:його мають більшість дрібних вірусів та значна частина вірусів середніх розмірів. Форма таких вірусів сферична. Капсомери капсиду розташовуються навколо нукл кислоти, як навколо правильного ізометричного тіла. білкова оболонка у таких вірусів наближається до форми икосайдра-правильного 20 гранника. Комбінованийтип симетрії: складається із спірального та кубічного. Його мають усі фаги та деякі складноустрвіруси сімейства коксвіриди. У них зовнішня оболонка кубічного, капсидна по спіральному. У фагів - головка по ікосейндричному типу, відросток по спіральному.

18. Основні стадії першої фази репродукції вірусів.Це фаза інфікування клітини, у цю фазу віріон повинен зв'язатися з клітиною, проникнути у клітину та роздягнеться. Перша стадія адсорбції віріонів на поверхні клітини може відбуватися двома шляхами: фізикохімічним (неспецефічний); рецепторний (спецефіч). Фізико хімічний шлях визначається взаємодією поверхневих електростатичних сил, які виникають між позитивно зарядженими групами вірусних білків і запереченнями зарядженими карбоксинами, сульфатними, фосфатними групами клітинної стінки. Рецепторний ґрунтується на специфічній взаємодії рецептора вірусного білка з компліментарними рецепторами поверхні клітинної стінки. Рецептори вірусів і рецептори чутливих до цього вірусу клітин мають конфігурацію, що взаємодоповнює (як ключ до замку). Якщо ж клітина не чутлива, то реабсорбція ніколи не відбудеться. Друга проникнення – у різних вірусів відбувається різними шляхами: з допомогою віропексису; шляхом сплавлення оболонок. Віропексіс– цей шлях подібний до піноцитозу. Спочатку в місці адсорбції на поверхні клітини відбувається інвагінація клітинної стінки мембрани, потім краї мембрани стуляються з усередині клітини в клітинній вакуолі виявляється віріон з усіма своїми оболонками. Шляхом сплавлення- у цьому випадку дільниці вірусної оболонки і оболонки клітини, що приймають інш до ін., розплавляються під дією вірус-спецефічних ферментів і в клітині виявляється тільки вірусна нукл кислота при цьому залишки вірусу вбудовуються в оболонку клітини. Третя стадія- Депротенізація - звільнення від оболонок - залежить від шляхів проникнення вірусу в клітину. Якщо шляхом сплавлення оболонок то депротоніз як окрему стадію не виділяють, то вона відбувається одночасно з проникненням вірусу. Якщо проникнення шляхом віропексису то звільнення вірусної нукл кислий від оболонок починається після руйнування білків, ліпідів, жирів, що входять до складу вірусних оболонок. Усі стадії температурозалежні.

20. Транскрипція. Це переписування генетичної інформації з вірусної нук кислий на новостворену за законами генетичного коду вірусну інформаційну РНК. (вірус повинен уявити білок синтезованій клітині, перетворитися на РНК). Кінцевий продукт транскрипції – вірусна інформаційна РНК. У односпіральних + РНК транскрипц відсутня, ті їх геномна вірусна РНК володіє інформацією РНК. У односпіральних -РНК геном не може здійснювати функцію інформаційної РНК та його РНК трансгібується за допомогою вірусу специфічного ферменту РНК залежна РНК поліміразу. МАЛЮНОК!

21. Трансляція. Це процес перекладу гентической інформації що міститься у вірусних інформаційних РНК на специфічну послідовність амінокислот. Відбувається переклад коли чотирьох підстав заклечених у вірусній інформаційній РНК код 20 амінокислот. Кінцевий продукт трансл – вірусні білки. Синтез білка – на рибосомах клітини. Складається з 3х фаз: ініціація трансліції – початок трансляції; продовження; термінація – кінець трансляції. Ініціація заснована на формуванні комплексу компонентів необхідних для початку трансляції тобто ініціаторного комплексу з так само заснована на впізнанні рибосоми вірусної інформаційної РНК і зв'язування її з певними ділянками, які носить назву шапочка. Це метильований гуанін. Після впізнавання шапочки рибосома ковзає вниз молекулою інформаційної РНК поки не дійде до ділянки на якому починається декодування інформації.

5. Хімічний склад вірусів.Віруси складаються з нуклеїнових кислот (ДНК, РНК). Нуклеїнові кислоти представлені полінуклеотидами, що складаються з окремих неуклеотидів. Кожен нуклеотид складається з 3х суб'єдениць: залишок фосфорної кислоти, вуглевод, азатиста основа. Вірусні білки : Складаються з амінокислот Склад вірусного білка залежить від порядку чергування амінокислот, цей порядок визначається генетичною інформацією, закадованою у вірусному геномі. Вірусні білки ділять на структурні та неструктурні. Структурні білки входять до складу зрілих віріонів. Неструктурні б не входять до складу зрілих віріонів, але є обов'язковими на певних стадіях репродукції. Структурнівірусні білки діляться залежно від розташування у віріоні на слід групи: капсидні білки – у капсиді; суперкапсидні б - у суперкапсиді (основна маса на білок, є ще жири та вуглеводи); матриксні білки – білки мембранного шару; білки вірусної серцевини – предст ферментами. Неструктурні- Залежно від функцій які вони виконують ділять на: ругулятор експресії вірусного геному; інгібітори клітинного біосинтезу; індуктори руйнування клітин; попередники вірусних білкові структурні вір білки; деякі вірусні ферменти – не входять до складу зрілих віріонів. Ліпіди: в основному входять до частини суреркапсидної оболонки віріону у складно влаштованих вірусів. Усі вони не кодуються вір геном і мають клітинне походження. Представлені вони фосфоліпідами, гліколіпідами. Вуглеводи: входять до складу суперкапсид обол, не кодуються вірусним геномом і мають клітинне походження, представлені глікопротеїдами та гліколіпідами. . Вірусні ферменти: Мають білкову природу. Вони можуть бути пов'язані безпосередньо з віріоном амб не пов'язані - не структурні. У стадію зміни інформації беруть участь ферменти ранні полімірази та ранні реплікази. Належать вони до інгібіторів клітинного біосинтезу. Ферменти, що трансгібують вірусний геном: у ДНКмістять вірусів - ДНК залежні РНК полімірази в клітині є, в деяких випадках вона доступна для вірусів, в деяких немає. Може мати як клітинне походження, так і вірусне. У ДНК містять вірусів розмножуються в ядрі має клітинне походження. У цитоплазмі – вірусне походження – віруспецефічний.

У РНК:РНК залежна ДНК поліміразу – у клітині його немає, потрібен для “-” містять РНК і ДНК, що містять у вір сімейства ретровіриди фермент трансгібуючий вірусний геном називається РНК залежні ДНК полімірази. Цей фермент має назву: ревертазу, зворотну транскриптазу. Ферменти, що беруть участь у формуванні вірусних білків: протеази, протеїнкеназу.

13. Бактеріофаги.Вірус бактерій. Відомі ДНК та РНК бактеріофаги. Більшість із ДНК фагів двоспіральні. РНК фаги односпіральні. Нуклеїнова кислота фага оточена поліедричним капсидом (головка), до якого у багатьох фагів приєднується відросток (хвіст). Діаметр головок приблизно 60-95 нм, а довжина відростків 250нм при товщині 10-25 нм. Відросток є структурою прикріплення до бактерії. Взаємодія б і мікробних клітин - складний біологічний процес, результат якого залежить від властивостей фагів і проявляється лізисом бактеріальних клітин. бактеріофагів використовують для діагностики (сибірка); для лікування бактеріальних інф; для профілактики інф(сальмонельоз). МАЛЮНОК!

22. Реплікація вірусної ДНК.

23. Реплікація вірусних РНК. Односпіральна РНК з негативним геномом:

25. Складання віріонів та вихід їх із клітини.

: петем вибуху, розрив, руйнування клітини в якому сформувалися зрілі віріони (простовпорядковані віруси) клітина гине. Складнийбудовані виходять тим, що брунькування тобто виходять через клітинну стінку, відбруньковуються. При цьому клітина гине не відразу, а коли її запаси буде витрачено

19. Друга фаза репродукції.Екліпс стадія:стадія зміни інформації. У цю стадію відбувається пригнічення функції клітинного геному за рахунок того, що вірус нуклеїнова кислота блокує і вірусні ферменти блокують генетичний аппарта клітини та синтезуючі системи клітини. Це призводить до того, що сто клітина припиняє репродукцію власних клітинних компонентів і перебудовується на репродукцію вірусних компонентів. Тут беруть участь ранні реплікази та ранні полімірази. Транскрипція:Це переписування генетичної інформації з вірусної нук кислий на новостворену за законами генетичного коду вірусну інформаційну РНК. (вірус повинен уявити білок синтезованій клітині, перетворитися на РНК). Кінцевий продукт транскрипції – вірусна інформаційна РНК. У односпіральних + РНК транскрипц відсутня, ті їх геномна вірусна РНК володіє інформацією РНК. У односпіральних -РНК геном не може здійснювати функцію інформаційної РНК та його РНК трансгібується за допомогою вірусу специфічного ферменту РНК залежна РНК поліміразу. МАЛЮНОК!Трансляція:Це процес перекладу гентической інформації що міститься у вірусних інформаційних РНК на специфічну послідовність амінокислот. Відбувається переклад коли чотирьох підстав заклечених у вірусній інформаційній РНК код 20 амінокислот. Кінцевий продукт трансл – вірусні білки. Синтез білка – на рибосомах клітини. Складається з 3х фаз: ініціація трансліції – початок трансляції; продовження; термінація – кінець трансляції. Ініціація заснована на формуванні комплексу компонентів необхідних для початку трансляції тобто ініціаторного комплексу з так само заснована на впізнанні рибосоми вірусної інформаційної РНК і зв'язування її з певними ділянками, які носить назву шапочка. Це метильований гуанін. Після впізнавання шапочки рибосома ковзає вниз молекулою інформаційної РНК поки не дійде до ділянки на якому починається декодування інформації. Реплікація вірусних ДНК: Реплікація двох спіральних ДНК:двоспир молекула ДНК спочатку роз'єднується на 2 окремі нитки за допомогою клітинних ферментів нуклеаз, потім на одній з ниток вірусної ДНК якої є матрицею формується вірусна інформаційна ДНК. Це відбувається за допомогою вірусспецефічного або клітинного ферменту ДНК залежної полімірази РНК. Потім вірусна інформація РНК переміщається на рибосому клітини де відбувається трансляція з утворенням вірусних білків і ферментів у тому числі ферменту ДНК полімірази. За допомогою ДНК-полімірази з нуклеотидів клітини будується друга компліментарна нитка ДНК. Таким чином, синтезуються нові молекули двоспіральних ДНК. Реплікація односпіральних ДНК:односпір ДНК мають позитивну полярність. За допомогою вірусу специфічного ферменту ДНК залежна ДНК полімірази на матриці вірусної односпіральної ДНК утворюється компліментарна мінус нитка ДНК. Синтезується двоспіральна структура, яка називається реплікативна форма. Потім на матриці мінус нитки реплікативної форми утворюється плюс нитки односпіральної ДНК шляхом витіснення плюс нитки ДНК реплікативної форми. Реплікація вірусних РНК: Односпіральна РНК з негативним геномом:Одночасно після проникнення в клітину відбувається транскрипція з утворенням вірусної інформації РНК плюс. У цьому беруть участь вірус специфічний фермент РНК, залежна від РНК поліміразу. Потім вір інф РНК транслюється з утворенням білків та ферменту РНК полімірази. Надалі за допомогою РНК полімірази на матриці плюс нитки інформаційної РНК утворюється дочірні односпіральні мінус нитки РНК. Односпіральна РНК з позитивним геномом:після проникнення в клітину плюс РНК відразу зв'язується з рибосомами, де транслюється з утворенням білків і ферменту в тому числі ферменту РНК реплікази. Потім під впливом РНК реплікази утворюється реплікативна форма. На матриці мінус РНК реплікативної форми образ плюс нитки РНК шляхом витіснення з реплікативної форми. Реплікація двоспіральних вірусних РНК:синтез інформаційних вірусних РНК відбувається на матриці двоспіральної РНК за допомогою ферменту РНК залежна від РНК полімірази. Транскрипція на матриці нитки РНК кожен фрагмент транскрибтрується окремо. Потім транслюються з утворенням білків і ферменту РНК полімірази за допомогою цього ферменту на плюс нитках інформаційної РНК утворюють компліментарні мінс нитки РНК тобто двох спіральні РНК. Складання віріонів та вихід їх із клітини: 2 стратегії при складанні, дозріванні та виході із зараженої клітини: здійснення складання та дозрівання всередині клітин; поєднання останнього ступеня складання віріону з виходом із зараженої клітини.

Складання здійснюється шляхом простого агрігатування, тобто поєднання вір білка з нукл кислотою відбувається під дією фізикохімічних факторів, тобто здійснюється самоскладання. В її основі лежить об'єднання та спецефічне без білкове та білок-нуклеїнове впізнавання. Формується нуклеокапсид. Для просто влаштований вірусів на цьому процес самоскладання закінчується. У складноустрій вірусів процес самоздійснився інакше. Частина білка йде на формування нуклеокапсиду кіт формується як у простоустр вірусів а частина білків переміщається до клітинної мембрани. Туди ж надалі переміщається сформований нуклеокапсид. І формування суперкапсид оболонки відбувається при виході віріону з клітини, тобто нуклеокапсид покривається зверху білками, які перемістилися до клітинної мембрани і при виході в цю зовнішню оболонку вбудовуються жири та вуглеводи з клітини. . Вихід здійснюється двома шляхами: петем вибуху, розрив, руйнування клітини в якому сформувалися зрілі віріони (простовпорядковані віруси) клітина гине. Складнийбудовані виходять тим, що брунькування тобто виходять через клітинну стінку, відбруньковуються. При цьому клітина гине не відразу, а коли її запаси будуть витрачені.

62-63. Оспа овець та кіз(рід Caprippoxvirus). Контагіозна ектіма овець та кіз(рід Parapoxvirus). Сімейство: poxviridae. ДНК, що містять. Особливості репродукції: геном вірусу дуже великий. Навіть у клітинах заражених реплікація завершується через 6 годин. Проникнення відбувається шляхом сплавлення оболонок вірусної та клітинної. Після проникнення відбувається розщеплення двоспіральної ДНК та реплікація починається відразу на обох нитках ДНК. Причому синтез вірусних компонентів відбувається у цитоплазмі клітин. Складання віріону в цитоплазмі. Вихід шляхом брунькування.

2. Роль вірусів в інфекційній патології тварин. В даний час вірусні хвороби мають велике значення в інфекційній патології тварин, людини та рослин. Їх роль зростає в міру зниження та ліквідації бактеріальних, мікозних та протозойних захворювань. Вірусні хвороби приблизно становлять 80 відсотків у медицині, а у ветеринарії 50 відс. Відомо понад 500 хвороб, що викликаються вірусами. Вірусне походження встановлено у особливо небезпечних хвороб як ящур, чума крс, чума свиней тощо. вірусологію можна розділити на загальну та приватну. Загальна вивчає природу та походження вірусів, їх класифікацію, будову та хімічний склад, генетику та селекцію, методи діагностики та профілактики, основи противірусного імунітету. Приватна вір вивчає назву та систематичне положення конкретних збудників, будову, розміри та стійкість віріону, терапію, методів діагностики, профілактику.

1. Історія розвитку. Перший період починається з давніх-давен до 1892 р. У цей період вірусологія як самостійна наука не існувала. Вивчення хвороб із невідомою етіологією займалися бактеріологи. Другий період – формування вірусології як самості науки – охоплює 1892-1950гг. цей період розпочався з відкриття російського ботаніка Д.І. Івановського (1898) філітрування збудника мозаїчної хвороби тютюну. Івановський вивчаючи етіологію хвороби тютюну встановив, що цю хворобу викликає особливий мікроорганізм, який проходить крізь бактеріальні фільтри. Він невидимий під світловим мікроскопом. Чи не росте на штучних піт середовищах. надалі подібні м.о були виділені в інших рослин і тварин і людини. Їх об'єднали у самостійну групу – ультровіруси. У 30-х роках 20 в вірусологічній практиці стали застосовувати курячі ембріони. У 1956 р. Стенлі вдалося поділити вірус на основні компоненти - білок і нуклеїн кислоти. Наприкінці 40-х років 20в створення електронних мікро Руденберг. А світловий створив Левенгук. Радянські вчені зробили внесок у вірусологію: жданів, лихачів, сюрин.

48. Методика отримання одношарових первинно-трипсинізованих клітинних культур.Одношарові кл потрібні для індикації вірса. Її одержують із тканин чи органів шляхом обробки їх трипсином. Одношарові діляться на 4 групи: первиннотрипсинізірів; субкультури; диплоїдні або напівперевиваються; перевиваються. Тканину подрібнюють та диспергують ферментом – трипсином. Потім трипсин видаляють за допомогою центрифугування, а до отриманого осаду додають певний об'єм житкою живильного середовища. Клітини вирощують як одного шару – моношару на внутрішній поверхні скла. Постійна потреба органів від здорових тварин. Івикористовують ембріонів 9-112 дн. Овоскопія. Обробка шкаралупи. Ножицями зрізають шкаралупу вище межі ляка. Стерильно витягують ембріон. Відмивають розчином хенксу. Готують м'язовий мішок. Відмивають розчином хенксу. Тканину подрібнюють ножицями. Переносять у колбу для трипсинізації. Колбу ставлять на магнітну мішалку 15 хвилин. Суспензію охолоджують у посудині з льодом. Фільтрують у колбоприймач. Завис клітин центрифугують 10-15 хвилин. Видаляють трипсин. З осаду клітин готують об'єднану масу, розливають пробірки по 1 мл і культивують клітини.

47. Основні розчини та живильні середовища.За походженнямрозрізняють природні пит середовища та штучні пит середовища. Натур – з біологічно активних: ембріональна, алантоїсна житкість плюс додавання сольових збалансованих розчинів. Штучні – готують із окремих компонентів. Найчастіше використовують універсальні піт середовища, а можуть бути спеціальні. Універсальна це середовище 199 та середовище Голка. До складу мистецтв середовищ повинні входити амінокислоти, вітаміни, ферменти та збалансовані сольові розчини, іноді індикатор (феноловий червоний). Суть індикатора – виявлення вірусу зміни кольору. У процесі життя клоччя рН змінюється в кислу сторону. У кислому середовищі колір індикатора з малиново-червоного змінюється на жовтий. У питат середу додають іноді нормальну сироватку крові та об'ємі 100% від об'єму піт середовища. Сироватка крові називається фактором зростання. Її додають для розмноження клітин, тільки в растові піт середовища . За цілями використання:ростові піт середовища – є сироватка; підтримуючі – сироватки немає. Збалансовані сольові розчини: всі вони похідні фіз розчину. Використовують як основу для приготування піт середовищ і при всіх маніпуляціях із клітинними культурами (відмити щось). Це розчини Хенкса та Ерла. Диспергуючі розчини: для поділу клітин ін від ін та клітин від скла. Розчини пепсину, трипсину. Від скла – розчини версину. Розчин версину пов'язує катіони кальцію.

50. Титр вірусу. Титр вірусу - це кількість вірусу тобто доза в одиниці об'єму вірусомісткого матеріалу. 3 методи титрування: 1 метод: титрування вірусу за інфекційною дією вірусу зі статистичним оцінюваним ефектом. За методикою риду та мінчу або за кербером. Титр виявляється у 50% дозах. Це ЕД50. Для цього методу титрування можна використовувати будь-яку біологічну модель але ця модель повинна бути чутлива до вірусу, що титрується (клітинні культ; ембріони; лаб тварини). За інфекційною дією заражених біологічних моделей ділять за такими ознаками: за клінічно визнання; за патоморфологічною змінено; щодо загибелі моделі; з накопичення гемаглютиніну. Від дози вірусу залежить результати роботи. Встановлено що доза вірусу інфекційний ефект, що викликає 50%, найменш схильна до коливань і є найбільш визначається з усіх можливих доз. Титр виявляється в ефективних 50% дозах. Це ЕД 50. Залежно від використовуваної біологічної моделі та від отриманого ефекту 50% доза може виражатися в наступних одиницях: ЛД 50 -це 50% летальна доза одержувана на лаб живий за летальним ефектом. ВД 50– це 50% інфекційна доза, що визначається на лаб живий за клінічними ознаками або за патоморфологічними змінами. ЕЛД 50– це 50% ембріональна летальна доза, що визначається на курячих ембріонах за роками. ЕІД 50– це 50% ембріональна інфекційна доза, що визначається на курячих ембріонах за патоморфологічними зрадами та накопиченням гемаглютиніну. ЦПД 50– це 50% цитопатогенна доза, що визначається на клітинних культурах по цпд. Якщо в заражених системах ми не спостерігаємо 50% ефекту ті ІД 50 то титр розраховуємо по ріду і мінчу: lg ЛД 50 = lg ВКД - (% років ВКД - 50%) / (% років ВКД - % років НКД) ВСЕ ЦЕ ПОМНОЖЕНЕ lg кратності розведення. 2 метод : з інфекційної дії вірусу з оцінкою одиничного ефекту. При методі бляшкоутворення у клітинній культурі – одиничний ефект. Виражається в віспотворних одиницях або в бляшку образ од БОЄ. Готують 10-кратне розведення вірусу; підбирають відчуває біологічну модель; у кожному розведенні вірусу заражають щонайменше 4 ембріонів. Титр вичіслюють за формулою Т=а поділена на V*n. а-середня кількість оспін або бляшок. V - це обсяг вурусодерж матеріалу = 0.2. n-це ступінь розведення вірусу. 3 мотод: за гемаглютинуючою дією вірусу в ГАЄН. Ставлять РДА.

38. Принципи лабораторної діагностики вірусних інфекцій.

Лабораторні дослідження відіграють важливу роль у встановленні діагнозу інфекційних хвороб, призначенні етіотропної терапії, проведенні контролю за ефективністю лікування. Процес специфічної лабораторної діагностики заснований на виявленні збудника та реакції реакції організму людини в ході інфекційного процесу. Він складається з трьох етапів: збору матеріалу, транспортування його (шпора № 39), та його дослідження в лабораторії: 1) Вірусологічний метод включає два основні етапи: виділення вірусів та їх ідентифікацію. Для виділення вірусів використовують культури клітин, курячі ембріони, іноді лабораторні тварини. Наявність вірусу в заражених культурах визначають у розвитку специфічної дегенерації клітин, тобто. цитопатогенної дії, виявлення внутрішньоклітинних включень, а також на основі виявлення специфічного антигену методом імунофлюоресценції, позитивних реакцій гемадсорбції та гемаглютинації. Віруси ідентифікують за допомогою імунологічних методів: реакції гальмування гемаглютинації, зв'язування комплементу, нейтралізації, преципітації гелю, імунофлюоресценції. 2) Серологічні реакції; 3)Імунологічний метод (біопроби); 4) ІФА та ПЛР. Після отримання результатів обстеження та з урахуванням епізоотологічних та клінічних даних встановлюють заключний діагноз.

39.Взяття, підготовка та пересилання пат. Матеріал для вірусолог. Дослідження.

Взяття, транспортування та дослідження пат. матеріалу регламентується ветеринарним законодавством При взятті враховують тропізм вірусу – краща локалізація вірусу при даній хворобі та патогенез. Час взяття пат. матеріалу до кінця його дослідження – 2-4 години. Якщо часу потрібно більше – консервувати (хім. методи – 50% розчин гліцерину, фіз. – заморожування), але не для люмінісц. мікроскопії. Транспортування у спец. контейнерах з супроводу. документом та умисним. Підготовка полягає у вилученні з клітин вірусу. Рідк. матеріал – фільтрація та центрифугування. Для очищення від бактерій – бактеріальний. фільтри та антибіотики (500-2000 ОД на 1 мл), від грибів - фунгіциди (25 ОД на 1 мл), тримають 30-40 хв, роблять посіви на питат. середовища (аероби-МПА, МПБ, МПЖ, анаероби-Кітта-Тароцці, гриби-Чапека, Сабуро). Щільний пат.матеріал: 1) беруть пат.матеріал 1-1,5 г; 2) ножицями подрібнюють; 3) розтирають зі стерильн. склом або піском у ступці; 4) 10% суспензія з розчином Хенкса; 5) 2 рази заморожують і розморожують; 6) фільтрація через марлевий фільтр; 7) центрифугування (3000 об/хв, 15 хв); 8) надосадова рідина - віруссодержащий матеріал, його перевіряють на бактерії (пит. середовища), додають антибіотики та фунгіциди.

40.Мікроскопічний метод дослідження у вірусології.

1.Світлова мікроскопія: 1)для виявлення вірусу віспи(метод сріблення по Морозову); 2)Для виявлення тілець-включень (це скупчення віріонів або з частин або продуктів реакції клітини на вірус; вони м.б. внутрішньоядерні та цитоплазматичні); 3) виявлення ЦПД вірусу (округлення, фрагментація, загибель); 4) виявлення симпластів; 5) робота з К/К; 6) оцінка серолога. реакцій (ІФА, РДАд, РТГАд). 2.Люмінісцентна мікроскопія:суть - при опроміненні УФ-променями атоми збуджуються, потім переходять у початковий стан із виділенням енергії у вигляді світлового випромінювання, інтенсивність його оцінюють у хрестах(смарагд.-зел. = ++++; зел. = ++ +;зел.-жовт.=++;жовт.=+;немає свічення=-). Складне - МФА.Суть МФА - специфічна. взаємодія антитіла із міченою флюорохромами сироваткою (кон'югатом). 3.Електронна мікроскопія: 1) виявлення будь-якого вірусу; 2) дослідження його розмірів, форми, структури, типу симетрії, репродукції; 3) дослідження взаємодії вірусу з клітиною.

У вірусологічній лабораторії проводять роботу з виділення штамів вірусів, їх ідентифікації та культивування, виконуються різні наукові дослідження. При роботі з вірусами необхідно передусім:

1. Не допустити забруднення штамів вірусів сторонньою мікрофлорою;

2. Забезпечити безпеку працюючого персоналу від можливого зараження вірусами;

3. Забезпечити безпеку навколишнього населення від зараження вірусними інфекціями через стічні води, трупи експериментальних тварин тощо.

При дослідженні матеріалів, отриманих від хворих на вірусні інфекції, з метою лабораторної діагностики цих захворювань застосовуються різні методи:

· Методи електронної та меншою мірою світлової мікроскопії;

· Методи виділення та культивування вірусів у культурах клітин;

· Методи виділення та культивування вірусів у курячих ембріонах, що розвиваються, і в організмі чутливих експериментальних тварин;

· Виявлення вірусів за їх гемагглютинуючою здатністю;

· Різні серологічні методи дослідження: традиційні та експрес-методи;

· Молекулярно-генетичні методи дослідження – молекулярна гібридизація та полімеразна ланцюгова реакція.

1.1.2. Матеріали, що досліджуються при вірусних інфекціях

При взятті інфекційного матеріалу від людей та тварин необхідно враховувати тропізм вірусів до певних тканин та органів, шляхи виділення вірусу у зовнішнє середовище та особливості патогенезу тієї чи іншої вірусної інфекції.

Розрізняють пневмотропні, ентеротропні, гепатотропні, лімфотропні, нейротропні та дермотропні віруси. Залежно від тропізму дослідженню піддають різні матеріали. Наприклад, досліджують слиз із зіва, мокротиння тощо, якщо віру пневмотропний; випорожнення – при ентеротропних вірусах; рідина з візикул або пустул, скоринки - якщо вірус має дермотропність і т.д.

1.1.3. Обробка вірусовмісного матеріалу

Інфекційні матеріали, взяті з урахуванням тропізму вірусів і з дотриманням асептики, поміщають у стерильну посуд, ретельно закупорюють її і направляють у лабораторію, помістивши термос з льодом.

Матеріал рекомендується досліджувати у найкоротший термін, оскільки віруси швидко інактивуються. Збереженню вірусу сприяє розміщення досліджуваного матеріалу (у 50% розчині гліцерину) в холодильник при температурі не вище 5 про С. Але найнадійніший спосіб - це зберігання в замороженому стані при температурі -45 про С і нижче; за таких умов вірус може залишатися життєздатним тривалий час.

Обробка щільного матеріалу, що містить віруси, починається з розтирання його у ступці або подрібнення у спеціальних апаратах – гомогенізаторах. Потім готується 10%-ная суспензія в сольовому розчині, яку центрифугують при 2000-3000 об/хв протягом 15-30 хвилин для осадження великих частинок. Віруси залишаються в надосадовій рідині, яку і піддають подальшому дослідженню.

Рідкий матеріал містить безпосередньо центрифугують і також отримують надосадову рідину.

Якщо є сумніви в бактеріологічній стерильності досліджуваної надсадкової рідини, що містить до неї, до неї додають антибіотики, щоб знищити сторонні мікроорганізми. Антибіотики не впливають на віруси і вони зберігають свою життєздатність.

1.1.4.Мікроскопічні методи дослідження у вірусології

- Електронна мікроскопія

Електронноскопічні препарати готують з очищених і концентрованих вірусних суспензій або ультратонких зрізів тканин, заражених вірусами. Вірусні об'єкти наносять на спеціальні плівки-підкладки, поміщені на опорні сіточки. Плівки-підкладки повинні бути дуже тонкими (не більше 30 нм товщини), прозорими та досить міцними, наприклад, колоїдійно-вугільні. Плівки наносять на сіточки з міді (діаметром 2-3 мм) з численними отворами. Далі препарати обробляють у різний спосіб.

Методи напилення металамизастосовують для одержання контрастних препаратів. Пари важких металів (золота, платини, урану та ін), що утворюються в спеціальному приладі в умовах вакууму і високої температури, направляють під гострим кутом на вірус, що містить. Віруси виявляються покритими тонким шаром металу.

Метод негативного контрастуваннязаснований на тому, що при обробці препарату деякими солями важких металів, наприклад, 1-2%-ним розчином фосфорно-вольфрамової кислоти, створюється щільніший шар, що не пропускає електрони, а якому добре видно більш електроннопрозорі досліджувані об'єкти.

Метод ультратонких зрізів у поєднанні з негативним контрастуваннямє найкращим для вивчення тонкої будови віріонів та вивчення етапів взаємодії вірусів з клітиною, але водночас він найбільш складний. Досліджувані шматочки інфікованої тканини або іншого вірусомісткого матеріалу фіксують у спеціальному фіксаторі (наприклад, осмієвому). Зневоднюють шляхом послідовного приміщення спирти зростаючої фортеці. Заливають зразки спеціальною пластмасою, після полімеризації якої утворюються прозорі тверді блоки. З блоків готують ультратонкі зрізи товщиною 10-20 нм на спеціальному мікротомі. Отримані зрізи контрастують, поміщаючи розчин фосфорно-вольфрамової кислоти.

Приготовлені вищеописаними способами препарати вивчають в електронному мікроскопі, що просвічує, роздільна здатність якого досягає 0,2-0,3 нм. Зображення препарату спостерігають на флюаресцентному екрані електронного мікроскопа і фотографують спеціальні фотопластинки, з яких одержують відбитки. Отримувані збільшення: ×100000-×400000.

Скануюча електронна мікроскопіяздійснюється за допомогою скануючого електронного мікроскопа, в якому тонкий пучок електронів швидко переміщається досліджуваним об'єктом, тобто сканує його поверхню. В результаті виникає випромінювання вторинних електронів, яке, проходячи через катодно-променеву трубку, перетворюється на об'ємне зображення об'єкта на флюоресцентному екрані.

Скануюча мікроскопія дозволяє отримувати тривимірне зображення віріонів (попередньо препарат напилюють металами), розрізняти деталі будови поверхні, але не виявляє їх внутрішню структуру. Роздільна здатність скануючого мікроскопа дорівнює 7-20 нм.

- Світлова мікроскопія

У світловому мікроскопі можна побачити великі віруси, розміри яких знаходяться в межах роздільної здатності мікроскопа - не менше 0,2 мкм. А також внутрішньоклітинні включення в уражених вірусом тканинах.

Великі віруси, наприклад, поксвіруси, і включення виявляють за допомогою спеціальних методів фарбування, фазовому контрасті, в темному полі зору; застосовують і люмінесцентну мікроскопію.

Великі віруси виявляють шляхом забарвлення за Морозовим (срібленням). Для виявлення внутрішньоклітинних включень готологічні зрізи готують з уражених тканин, препарати-мазки або відбитки. Зазвичай препарати забарвлюють за Романівським-Гімзою, іноді іншими методами. Найбільше практичне значення має виявлення включень Бабеша-Негрі у нервових клітинах головного мозку при сказі. Для цього препарати фарбують Манном.

Люмінесцентна мікроскопіяПрепарати, виготовлені з матеріалів, що містять великі віруси, внутрішньоклітинні включення, скупчення вірусних антигенів, фарбують розчинами флюорохромних барвників. При люмінесцентній мікроскопії в УФ-світлі пофарбовані акридин-помаранчевим скупчення РНК-геномних вірусів і утворювані ними включення видно як червоні гранули, що світяться, на тлі блідо-зеленої цитоплазми клітин; ДНК-геномні віруси дають смарагдово-зелене свічення.

Імунофлюоресцентний методзаснований на з'єднанні вірусів, внутрішньоклітинних включень, скупчень вірусних антигенів зі специфічними противірусними антитілами, міченими флюорохромними барвниками. Комплекси, що утворилися, дають світіння при люмінесцентній мікроскопії.